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成骨培养条件下干细胞来源细胞外囊泡对骨髓间充质干细胞成骨性能分析

Analysis of the osteogenic performance of extracellular vesicles derived from stem cells on bone marrow mesenchymal stem cells under osteogenic culture conditions

摘要目的 探究加入成骨诱导前后脂肪间充质干细胞来源(dipose mesenchymal stem cells,ADSCs)与脐带间充质干细胞来源(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)的成骨能力是否存在差异.方法 对大鼠ADSCs和UCMSCs成骨诱导培养和普通培养,采用超速离心法提取不同培养方式大鼠ADSCs和UCMSCs来源EVs并进行鉴定,实验分为5组:BMSCs未添加EVs(对照组)、BMSCs+普通ADSC-EVs培养组(A组)、BMSCs+成骨ADSCs-EVs培养组(O-A组)、BMSCs+普通 UCMSC-EVs 培养组(U 组)、BMSCs+成骨 UCMSCs-EVs 培养组(O-U组).CCK-8检测EVs对BMSCs增殖能力的影响,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、qRT-PCR及Western blot检测添加不同培养条件EVs对BMSCs成骨能力的影响.结果 组、O-A组、U组、O-U组较对照组增殖能力明显增强,A组和U组增殖能力明显高于其他组(P<0.05).碱性磷酸酶染色及定量分析显示,O-A组和O-U组较对照组染色面积大且颜色深,碱性磷酸酶活性显著升高(P<0.01);茜素红染色显示,O-A组和O-U组较对照组矿化结节明显,OD值明显大于对照组(P<0.01).qRT-PCR和Western blot结果分别显示,O-A组、O-U组成骨相关因子在mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05).结论 成骨培养后的UCMSC-EVs、ADSC-EVs能促进BMSCs向成骨细胞方向分化.

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