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小窝在G蛋白偶联雌激素受体调控小鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合酶活性中的作用

Effect of caveolae on G protein coupled estrogen receptor-regulated nitric oxide synthase activity in mouse aortic endothelial cells

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摘要目的探讨小窝(caveolae)对雌激素通过G蛋白偶联雌激素受体(GPER)调控小鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响.方法当细胞融合度达到80％～90％时,选取内皮细胞分为对照1组、DMSO组、雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组(n=5),其中雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组按浓度梯度加入雌二醇(10、50、100 nmol/L),对照1组不予任何处理,DMSO组加入50 μl DMSO培养.另选取内皮细胞分为对照2组(未作任何处理)、阴性对照1组[加入小窝蛋白1(Cav-1)阴性对照干扰RNA]、Cav-1敲减组(加入Cav-1干扰RNA);选取部分内皮细胞设对照3组(未作任何处理)、阴性对照2组(加入GPER阴性对照干扰RNA)、GPER敲减组(加入GPER干扰RNA).检测Cav-1、GPER、eNOS、磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达.结果与对照1组比较,雌二醇3组p-eNOS蛋白表达明显增加(0.47±0.07 vs 0.20±0.04,P＜0.05).对照2组、阴性对照1组、Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与对照2组比较,Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).对照3组、阴性对照2组、GPER敲减组eNOS、p-eNOS表达比较,无统计学差异(P＞0.05).与对照3组比较,GPER敲减组GPER蛋白表达明显降低(0.56±0.22vs2.40±0.65,P＜0.05).结论小窝参与了雌激素通过GPER调控小鼠主动脉eNOS活性的过程.