核心蛋白聚糖对高糖诱导心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及纤维化的影响
Effects of decorin on mitogen-activate protein kinase signaling pathway and fibrosis of cardiomyocytes induced by high glucose
摘要目的 探讨核心蛋白聚糖(DCN)对高糖诱导的心肌细胞 H9c2 转化生长因子β(TGF-β)/p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路及纤维化的影响.方法 将心肌细胞 H9c2 随机分为 5 组:正常对照组(使用含 5.6 mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、高糖组(使用含 33 mmol/L葡萄糖的无血清培养液培养)、DCN低浓度组(使用含 33 mmol/L 葡萄糖和 0.25 μg/ml DCN 的无血清培养液培养)、DCN 中浓度组(使用含 33 mmol/L葡萄糖和 1.25 μg/ml DCN的无血清培养液培养)、DCN高浓度组(用含 33 mmol/L葡萄糖和 2.5 μg/ml DCN的无血清培养液培养),MTT法检测心肌细胞 H9c2 存活率;平板克隆实验检测各组 H9c2细胞克隆形成数;流式细胞术检测 H9c2 细胞周期;划痕实验检测各组 H9c2 细胞迁移能力;Western blot 法检测H9c2 细胞结缔组织生长因子(CTGF)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、纤维连接蛋白(FN)、TGF-β、p38MAPK 表达水平以及CREB磷酸化水平.结果 高糖组细胞存活率、克隆形成数、S期、G2/M期、MMP-9 表达水平显著低于正常对照组,G0/G1 期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK及磷酸化CREB表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);与高糖组比较,DCN 低、中、高浓度组细胞存活率[(90.77±1.13)%、(95.35±2.05)%、(98.70±2.30)%vs(73.23±1.09)%]、克隆形成数[(75.39±8.24)个、(92.28±9.94)个、(112.22±12.42)个 vs(54.57±6.19)个]依次上升(P<0.05);高糖组 G0/G1 期、划痕愈合率、CTGF、FN、TGF-β、p38MAPK 及磷酸化 CREB水平显著高于DCN低、中、高浓度组,S期、G2/M期、MMP-9 表达水平显著低于 DCN 低、中、高浓度组(P<0.05).结论 DCN 能够促进高糖诱导下 H9c2 细胞增殖,抑制迁移和心肌纤维化,可能与通过阻滞 TGF-β/p38MAPK/CREB通路有关.
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