虎杖苷对β淀粉样蛋白诱导体外皮质神经元线粒体氧化应激和功能障碍的保护作用
Protective effect of polydatin on beta-amyloid-induced mitochondrial oxidative stress and dysfunction in cortical neurons in vitro
摘要目的 探讨虎杖苷对β淀粉样蛋白25~35(Aβ25~35)诱导的原代培养大鼠皮质神经元损伤的保护作用及可能的作用机制.方法 原代培养SD大鼠皮质神经元,分为对照组、虎杖苷组、Aβ25~35组和联合组(Aβ25~35+虎杖苷).采用四甲基偶氮唑盐检测皮质神经元活力,2,7-二氯荧光素二乙酸酯探针或红色线粒体超氧化物荧光探针染色检测细胞内和线粒体活性氧水平,线粒体膜通透性转换孔(MPTP)试剂盒检测MPTP开放程度,蛋白免疫印记法检测细胞色素C及线粒体转录因子A(TFAM)表达.另外,测定细胞内电子传递链复合物(包括复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)活性和三磷酸腺苷(ATP)水平.采用高效液相色谱法测定线粒体中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG).结果 与对照组比较,Aβ25~35组皮质神经元细胞活力、线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与Aβ25~35组比较,虎杖苷组线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显增高,皮质神经元暴露3、6、12、24 h细胞内和线粒体内活性氧明显降低(P<0.05,P<0.01),联合组细胞色素C细胞质/线粒体比值、线粒体内 8-OHdG 水平明显低于 Aβ25~35 组[3.02±0.28 vs 5.73±0.45,P<0.05;(8.07±1.45)× 106 dG vs(16.07+2.29)×106dG,P<0.05].结论 虎杖苷可有效地保护皮质神经元免受Aβ25~35诱导的损伤,至少部分作用是通过抑制线粒体氧化应激和改善线粒体功能实现.
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