人胰岛素原基因在体外培养的NIH 3T3细胞中的基因转移和表达的研究

Gene transfer and expression of human proinsulin gene in NIH 3T3 cells in vitro

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摘要目的研究人胰岛素原基因在体外培养的小鼠成纤维细胞NIH 3T3细胞系的基因转移和表达情况,进而为1型糖尿病的基因治疗提供实验依据.方法采用脂质体转染法分别将未携带外源基因的反转录病毒载体pLNCX和携带大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)启动子-人胰岛素原基因(INS)的重组反转录病毒载体pN-PEPCK-INS转染到体外培养的NIH 3T3细胞系中.转染后72小时,用G418筛选出阳性细胞克隆并培养至24天,提取细胞的染色体DNA,行PCR扩增,电泳检查转入基因情况.同时用放射免疫分析方法监测培养液的胰岛素水平及转染后24天的细胞内胰岛素水平.结果 PCR证实pLNCX和pN-PEPCK-INS均整合到NIH 3T3细胞的染色体中.培养液的胰岛素水平在转染前后均无明显变化(P＞0.05),而转入pN-PEPCK-INS的NIH 3T3细胞内的胰岛素水平则于转染后24天明显高于未转染组(P＜0.01)及pLNCX转染组(P＜0.05).结论人胰岛素原基因在NIH 3T3细胞系的转移成功和在细胞内的高效表达说明基因治疗有望成为1型糖尿病的有效治疗途径之一.