换一批CREM基因在miR-199b-5p敲除小鼠精液和睾丸中的表达研究
Expression of the CREM gene in the semen and testis of miR-199b-5p knockout male mice
摘要目的:探讨miR-199b-5p基因敲除对雄性小鼠精液和睾丸中 CREM表达水平的影响.方法:选miR-199b-5p基因敲除(KO)雄性小鼠和野生型(WT)雄性C57BL/6小鼠.观察2组小鼠体重和睾丸指数.HE染色观察睾丸结构变化.显微镜下观察精子形态及计数精子浓度.数据库预测CREM与miR-199b-5p的靶向关系.RT-qPCR和Western印迹法分别检测2组小鼠睾丸中CREM mRNA和蛋白表达水平变化.结果:两组之间小鼠体重和睾丸指数无明显变化;与WT组比较,KO组小鼠精液精子计数稍下降,但无统计学差异(P＞0.05);精液涂片示KO组精子浓度较WT组稀疏,但无统计学差异(P＞0.05);睾丸病理示:与WT组比较,KO组睾丸体积较小,睾丸组织正常,生精小管可见各级生精细胞和支持细胞,生精小管界膜、管径无明显异常;数据库预测CREM基因是miR-199b-5p的靶基因;RT-qPCR结果示:与WT组比较,KO组雄鼠精液和睾丸组织中CREM mRNA表达水平均明显下降(P＜0.05),差异有统计学意义.Western印迹结果显示:与WT组比较,KO组雄鼠睾丸组织中CREM蛋白表达水平明显下降(P＜0.05),差异有统计学意义.随访半年,统计两组雄性小鼠出生数,发现KO组雄鼠的出生数较WT组明显下降(P＜0.05).结论:miR-199b-5p敲除小鼠精液和睾丸中CREM基因表达下调,推测miR-199b-5p可能靶向作用于CREM基因进而影响雄性小鼠的生育功能.
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