薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响

Effects of diosgenin on autophagy of human osteosarcoma cells

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摘要目的探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤细胞自噬的影响.方法 MTT法检测薯蓣皂苷元对人骨肉瘤MG63 和U2OS细胞增殖的影响,透射电镜技术观察细胞超微结构,免疫荧光法观察细胞自噬蛋白Beclin1 表达,Western blot法检测细胞自噬分子标记物 LC3、Beclin1 和 PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达.薯蓣皂苷元联合 PI3K通路抑制剂LY294002 处理MG63 和U2OS细胞,RT-qPCR法检测细胞Beclin1 mRNA表达;联合自噬抑制剂 3-methyladenine(3-MA)处理MG63 和U2OS细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot法检测细胞cleaved-caspase3 蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞caspase3 mRNA表达.结果薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤MG63 和U2OS细胞增殖,促使自噬体生成,增加LC3 Ⅱ、Beclin1 蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低LC3 I蛋白表达(P<0.01),可抑制PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平(P<0.05,P<0.01);联合自噬抑制剂干预后,薯蓣皂苷元对骨肉瘤细胞的增殖抑制作用降低,并下调了细胞caspase3 mRNA、cleaved-caspase3 蛋白表达(P<0.01).结论薯蓣皂苷元能抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞产生自噬,可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路以及上调LC3Ⅱ和Beclin1 蛋白表达有关,同时其诱导的自噬可促使骨肉瘤细胞死亡,诱导自噬性凋亡.