基于NF-κB信号通路探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对NCM460细胞凋亡的影响
Effects of ethyl acetate extract of Gentianopsis paludosa on the apoptosis of NCM460 cells via NF-κB signaling pathway
摘要目的 探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对人正常结肠上皮细胞NCM460凋亡的影响.方法 采用10 g/mL脂多糖(LPS)诱导NCM460细胞建立炎症模型,给予湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(50、100、200 g/mL)干预24 h,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,ELISA法检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6水平,TUNEL染色技术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB、p-NF-κB、IKKα/β、p-IKKα/β、IκBα、p-IκBα 蛋白表达,免疫荧光技术观察NF-κB在细胞核中的表达.结果 与对照组比较,LPS处理NCM460细胞24 h后细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡加重(P<0.01),细胞中IL-1β、IL-6水平升高(P<0.01),Bax、caspase-3、caspase-9、p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),并促进NF-κB入核;与LPS组比较,湿生扁扁蕾乙酸乙酯提取物干预24 h后细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡减轻(P<0.01),IL-1β、IL-6水平降低(P<0.01),Bax、caspase-3、caspase-9、p-IKKα/β/IKKα/β、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01),并抑制NF-κB入核.结论 湿生扁蕾乙酸乙酯提取物可能通过调控NF-κB信号通路改善LPS诱导的NCM460细胞凋亡.
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