基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨香青兰总黄酮对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响

Effects of total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.on ox-LDL-induced inflammatory response of RAW264.7 macrophages via NF-κB/NLRP3 signaling pathway

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摘要目的研究香青兰总黄酮(TFDM)通过调节核因子κB(NF-κB)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路减轻ox-LDL诱导RAW264.7 巨噬细胞炎症反应的作用.方法体外培养RAW264.7 巨噬细胞,将其分为正常组、模型组(50 μg/mL ox-LDL)、香青兰总黄酮组(100 μg/mL TFDM+50 μg/mL ox-LDL)、NF-κB 抑制剂组(10 μmol/L Bay11-7821+50 μg/mL ox-LDL)、香青兰总黄酮+抑制剂组(100 μg/mL TFDM+10μmol/L Bay11-7821+50 μg/mL ox-LDL).采用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒测定ROS表达,RT-qPCR法检测细胞NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18 和 IL-1βmRNA 表达,Western blot 法检测细胞 NF-κB p65、IκBα、NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-18 和 IL-1β蛋白表达,免疫荧光法检测细胞NF-κB p65和NLRP3蛋白表达.结果与正常组比较,模型组细胞ROS表达升高(P＜0.01),NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18 和IL-1βmRNA 表达升高(P＜0.05,P＜0.01),IκBα、胞浆 NF-κB p65 蛋白表达降低(P＜0.01),细胞核 NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β 和 IL-18 蛋白表达升高(P＜0.01),NF-κB p65和NLRP3蛋白荧光强度增强(P＜0.01).与模型组比较,香青兰总黄酮组和香青兰总黄酮+抑制剂组ROS表达降低(P＜0.01);香青兰总黄酮组、NF-κB抑制剂组和香青兰总黄酮+抑制剂组NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18 和 IL-1β mRNA 表达降低(P＜0.05,P＜0.01),IκBα、胞浆 NF-κB p65 蛋白表达升高(P＜0.05,P＜0.01),细胞核NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β 和 IL-18 蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),NF-κB p65 和 NLRP3 蛋白荧光强度减弱(P＜0.01).与香青兰总黄酮组比较,NF-κB抑制剂组各指标无明显变化(P＞0.05),香青兰总黄酮+抑制剂组IL-1β和 IL-18 mRNA 表达降低(P＜0.05),IκBα 蛋白表达升高(P＜0.05),细胞核 NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达降低(P＜0.05),NLRP3蛋白免疫荧光强度减弱(P＜0.05).结论香青兰总黄酮可抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,该作用可能与减少ROS和炎症因子的表达,抑制NF-κB/NLRP3信号通路的活化有关.