基于PGAM5-Drp1轴探讨温肺降浊方对Aβ25-35诱导BV-2细胞线粒体功能的影响
Effects of Wenfei Jiangzhuo Formula on mitochondrial function of Aβ25-35-induced BV-2 cells based on PGAM5-Drp1 axis
摘要目的 探讨温肺降浊方对Aβ25-35诱导BV-2细胞线粒体功能的影响.方法 通过Aβ25-35诱导BV-2细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,确定Aβ25-35干预的最佳浓度和时间点,设置LFHP-1c组(抑制剂)和温肺降浊方含药血清组.CCK-8法检测最佳干预浓度和时间点,Transwell实验观察细胞迁移情况,Hoechst 33342染色观察细胞凋亡情况,免疫荧光法检测PGAM5、Drp1的阳性细胞表达情况,RT-qPCR法和Western blot法检测细胞PGAM5、Drp1、OPA1、Mfn1/2 mRNA和蛋白表达.结果 以终浓度5 μmol/L的Aβ25-35干预48 h为制备AD细胞模型的最佳条件,20%温肺降浊方含药血清干预48 h细胞活性最佳.与对照组比较,模型组细胞迁移数量减少,存在较多亮蓝色阳性凋亡细胞,PGAM5、Drp1阳性细胞数、mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),OPA1、Mfn1/2 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组细胞迁移数量增加,亮蓝色阳性凋亡细胞减少,PGAM5、Drp1阳性细胞数、mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),OPA1、Mfn1/2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05).结论 温肺降浊方可以调控PGAM5-Drp1轴减轻AD模型细胞损伤,改善线粒体稳态平衡,从而提高认知水平,发挥脑保护效应.
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