换一批CTB-CPA融合基因构建、表达及其产物的免疫原性
Fusion of Cholera Toxin B Subunit Gene to Clostridium perfringens Alpha-Toxin gene, Expression and immunogenicity of expressed products against Clostridium perfringens type A toxin
摘要构建成含有编码霍乱毒素B亚单位(CTB)和产气荚膜梭菌α毒素(CPA)第70～370 位氨基酸的融合基因CTB-CPA,并在大肠杆菌中获得表达.经限制性内切酶鉴定和核苷酸序列分析表明,CPA 基因在重组质粒中与CTB 基因的连接向位是正确的,位于CTB 基因的下游并与CTB 基因处于同一阅读框架.重组菌株BL21(DE3)(pECTB-CPA)经IPTG 诱导后,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blot 检测表明,重组菌株可以表达CTB-CPA 融合蛋白.表达的产物以包涵体的形式存在,可分别被抗CT和A型产气荚膜梭菌抗毒素识别,表达量占菌体总蛋白的22.7%.用表达产物免疫小鼠后,所产生的对A型产气荚膜梭菌毒素攻击的免疫保护力高于用单独的A型产气荚膜梭菌类毒素免疫的小鼠所产生的免疫力,证明所表达的融合蛋白中CTB起到免疫佐剂的作用,增强CPA的免疫原性.
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