换一批大肠杆菌K88纤毛抗原的提纯和抗血清的制备
Purification of K88 Pilus Antigen of the Escherichia coli and Preparation of the Antiserum
摘要以5%绵羊血改良Minca琼脂筛选和克隆表达良好的K88+菌株,改良Minca琼脂培养获得K88菌液.用加热法及高速匀浆法使K88纤毛从菌体上脱下.饱和硫酸铵沉淀粗提,用Sepha-rose CL-4B凝胶过滤纯化K88抗原.提纯的抗原经SDS-PAGE电泳测定其分子量约为25 000,且仅此一条蛋白带;与K88抗血清进行琼脂扩散试验只出现一条沉淀线.用提纯的抗原经多次免疫家兔制备了K88抗血清.抗血清在玻板凝集试验中只凝集K88菌株,不凝集K99,987P或F41菌株;在琼扩试验中,只与K88粗提抗原出现一条沉淀线,且效价为1∶64,而不与K99,987P抗原出现沉淀线;在免疫电泳试验中,与无细胞K88纤毛液只出现一条沉淀线.鉴定结果表明,所制备的K88血清特异性强、效价高,可作为单因子血清用于凝集试验、琼扩试验等血清学试验,对K88菌株进行鉴定,对K88纤毛抗原进行定性和定量检测.
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