换一批REV重组env蛋白间接ELISA诊断试剂盒的研制
Development of an Indirect ELISA Kit to Detect REV Sera with Recombinant Env Protein
摘要以纯化的env蛋白为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA(ienv-ELISA)方法.ienv-ELISA工作条件优化结果表明,最佳包被液为CB;最佳封闭液浓度为1%BSA-PBS;最佳抗原包被量为8μg/mL;血清最佳稀释度为1:300;血清最佳作用时间为1h;二抗的最佳稀释度为1:5000;二抗最佳作用时间为1h;底物最佳显色时间为25min.重复性试验、特异性试验和对比试验结果显示,建立的ienv-ELISA方法有良好的可重复性,标准差均小于15%;与鸡MDV、ALV、NDV、H5N1、H9N1等病毒阳性抗体均无交叉反应;与REV抗体检测试剂盒(以REV全病毒为包被抗原)对比,所建立的ienv-ELISA诊断敏感性、诊断特异性以及准确率分别为90.625%、93.75%和92.7%.
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