换一批
换一批轻型链球菌临床分离株psaA基因敲除株的构建及其毒力影响的初步研究
Construction of psaA gene-knockout clinical isolate of Streptocococcus mitis and a preliminary study on its virulence change
摘要目的 构建轻型链球菌(S.mitis)临床分离株S.mitis008肺炎链球菌表面蛋白A(psaA)基因敲除菌株S.mitis00801,并检测其生长及毒力影响,为进一步分析轻型链球菌属细菌间psaA基因水平转移的功能学意义奠定基础.方法 采用长臂同源多聚酶链反应技术(LFH-PCR)构建含红霉素耐药基因(erm)片段及psaA基因上、下游同源序列的连接片段,并转化至S.mitis008中,在含红霉素的平板上筛选psaA基因敲除菌株,并采用PCR鉴定；进一步观察psaA基因敲除株S.mitis00801体外生长情况,并利用小鼠模型观察S.mitis008和S.mitis00801鼻咽部定植能力的差异.结果 PCR结果均证实轻型链球菌psaA基因敲除菌株S.mitis00801构建成功；S.mitis008和S.mitis00801体外生长情况比较无差异；在轻链球菌CBA/n小鼠鼻咽部定植模型中,psaA基因敲除菌株S.mitis00801定植能力较未敲除株S.mitis008明显减少,存在统计学差异(P＜0.01).结论 LFH-PCR技术构建psaA基因敲除菌株S.mitis00801方法切实可行,psaA基因的敲除对细菌的体外生长无影响,但降低了细菌在体内鼻咽部定植的能力.
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关键词
肺炎链球菌表面蛋白A轻型链球菌基因敲除鼻咽部定植Pneumococcal surface adhesin AStreptocococcus mitisGene knockoutNasopharyngeal colonization
分类号
R378.1
栏目名称
论著
DOI
10.3969/cma.j.issn.1674-6902.2013.05.007
发布时间
2013-12-09
基金项目
2010年国家自然科学基金青年科学基金
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