小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

Establishment of an optimized small interfering RNA transfection system for porcine endothelial cells

二维码有效期 120s

摘要目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA(SiRNA)转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰(RNAi)转染体系.方法针对猪α1,3-半乳糖苷转移酶(α1,3-GT)基因合成数对SiRNA分子,运用不同转染体系(DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000)转染永生化猪血管内皮细胞系(PED).分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1,3-GT作用下PED的α1,3-半乳糖残基(α-Gal)表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响.结果 PED能有效发生特异性RNA干扰现象,且呈明显的剂量依赖性特征.SiRNA-1与脂质体RiboJuice在12 nmol/L∶6 μl时,干扰效果最佳(67.3%～89.5%),整体量效优于DOSPA及Lipofectamine 2000转染体系.靶细胞转染SiRNA-1后48 h时的α-Gal相对表达水平为10.5%,而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象.脂质体转染体系在转染后6～12 h对靶细胞生长稍有影响,24 h后细胞活性逐渐恢复.结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制,RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式,为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础.