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TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞外泌体分泌miR-424-3p促进前列腺癌细胞增殖及转移

TGF-β1 induced hBMSCs exosomes to secrete miR-424-3p to promote the proliferation and migration of prostate cancer cells

摘要目的:探讨TGF-β1诱导骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化来源的外泌体对前列腺癌(PCa)细胞PC-3的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过ELISA检测碱性磷酸酶(ALP)活性和Western blot检测TGF-β1诱导hBMSCs成骨分化相关蛋白;采用超速离心法从细胞培养液中分离提取外泌体,使用投射电子显微镜(TEM)、纳米粒径追踪技术(NTA)以及Western blot对分离得到的外泌体进行鉴定;通过深度RNA测序技术鉴定TGF-β1诱导后hBMSCs外泌体中miRNA的表达谱和qPCR检测miRNA在外泌体中的表达水平;CCK8法检测细胞活力,Wound-healing检测细胞迁移能力,Trans-well试验检测细胞侵袭能力。结果:与对照组相比,TGF-β1能显著提高hBMSCs的ALP活性,以及成骨相关因子BMP-2、OCN和RUNX2蛋白表达水平(P<0.001)。与hBMSCs组相比,TGF-β1_hBMSCs组的细胞增殖、迁移和侵袭能力显著提高(P<0.001)。接着成功分离hBMSCs(hBMSCs_Exo组)和TGF-β1诱导后hBMSCs(TGF-β1_hBMSCs_Exo组)培养液上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察到外泌体典型的囊泡状结构,且表达CD9、CD63和CD81等外泌体特异性蛋白,其中TGF-β1_hBMSCs_Exo组浓度高于hBMSCs_Exo组浓度。基于miRNA测序显示TGF-β1_hBMSCs_Exo中95个miRNA分子表达升高,选择前5个miRNA进行qPCR验证,相比较于hBMSCs_Exo组,miR-424-3p在TGF-β1_hBMSCs_Exo组中显著升高(P<0.001)。这和miRNA测序结果相一致。与miRNA NC组相比,miR-424-3p mimic组和TGF-β1_hBMSCs_Exo中PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著升高(P<0.001);miR-424-3p mimic组和TGF-β1-Exo组细胞增殖、迁移和侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TGF-β1诱导hBMSCs外泌体miR-424-3p能显著提高PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能为出现骨转移性PCa个体化治疗提供新的靶点。

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作者 邓瑞锋 [1] 程璐 [2] 周宇林 [3] 刘远灵 [3] 江文聪 [3] 江敏耀 [3] 江福能 [4] 习明 [3] 学术成果认领
作者单位 510800 广州,南方医科大学第三临床医学院广州市花都区人民医院 [1] 广州市花都区人民医院检验科 [2] 广州市花都区人民医院泌尿外科 [3] 510180 广州市第一人民医院,广东省临床分子医学及分子诊断重点实验室 [4]
栏目名称 实验研究
DOI 10.3877/cma.j.issn.1674-3253.2024.01.015
发布时间 2024-03-01
基金项目
广州市科技计划项目 广州市医学重点学科建设项目
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