XBP1s 条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立

Establishment a knock-in mouse model with conditional overexpression of XBP1s gene

二维码有效期 120s

摘要目的：获得可进行条件性过表达 XBP1s 基因的 Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过 In-Fusion Cloning 的方法构建胚胎干细胞（ES 细胞）打靶载体，并进行线性化，电转染 JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性 ES 细胞克隆，经长片段 PCR 鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性 ES细胞经克隆扩增后，注射入 C57BL／6J 小鼠的囊胚中，获得嵌合鼠，筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL／6J 小鼠交配后获得阳性 F1代小鼠，并分别进行 PCR 和测序鉴定。结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功，经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性 ES 细胞克隆，通过长片段 PCR 的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认，共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性 ES 细胞克隆 E3、C6经扩增后注射 C57BL／6J 小鼠囊胚96个，通过胚胎移植，共获得2只高嵌合雄鼠，与野生型C57BL／6J 小鼠交配后获得3只 F1代杂合小鼠，经 PCR 及测序鉴定正确。结论成功建立了 XBP1s基因的 Rosa26定点敲入 F1代杂合子小鼠，为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s 条件性敲入小鼠奠定了基础。