大鼠脊髓损伤后降钙素基因相关肽及神经元钙超载的变化及相关性分析
Changes and prognosis of calcitonin gene-related peptide and neuronal calcium overload after spinal cord injury in rats
摘要目的研究脊髓损伤(SCI)后神经元内钙离子(Ca2+)浓度及血浆中降钙素基因相关肽(CGRP)浓度的变化,及其与SCI 严重程度之间的关系。方法100 只雄性Wistar 大鼠按照随机数字表法以3∶1分为实验组(75只)和对照组(25只),实验组采用Feeney法按自由落体致伤原理制成不同损伤程度的SCI大鼠病理模型,并按照损伤严重程度分为轻度组(25只)、中度组(25只)和重度组(25只),对照组仅行手术操作,不进行打击损伤。在建模后0.5、6、12、24、48、72 h,每组分别取10只大鼠予以眼内眦取血,采用放射免疫分析法测定血浆中CGRP浓度;并分别于各时间点取3只大鼠(伤后72 h的3只大鼠从眼内眦取血的10只大鼠中随机选取)予以断颈处死,取出脊髓(T9~11),分离神经元并进行纯度检测,通过激光扫描共聚焦荧光显微镜测定神经元内Ca2+浓度。结果实验组大鼠的神经元内Ca2+荧光像素值在损伤后持续升高,24 h时达到最高,之后逐渐下降,各时间点的Ca2+荧光像素值均明显高于对照组,且重度组>中度组>轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠血浆中CGRP 浓度在损伤后0.5 h 快速上升,显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);损伤后6 h开始降低,48 h逐渐升高,且损伤后6、12、24、48 h的血浆中CGRP 浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组中,3组大鼠损伤后0.5 h血浆中CGRP 浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05);损伤后12、24、48 h 血浆中CGRP 浓度比较,重度组<中度组<轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,中度组和重度组的Ca2+浓度和CGRP 浓度呈负相关(中度组:r=-0.513,P<0.001;重度组:r=-0.391,P=0.013)。结论SCI早期会出现神经元内钙超载和CGRP 浓度异常,且二者呈负相关,可能与原发损伤信号的传导及继发性级联反应二次损伤密切相关,SCI发生后及早维持神经元内Ca2+浓度和血浆中CGRP浓度的稳态,有利于SCI患者的治疗并改善预后。
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