发热伴血小板减少综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

Establishment and application of real-time fluorescent quantitative RT-PCR method for detection of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus

二维码有效期 120s

摘要目的建立一种基于Taqman探针的高灵敏度一步法实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV).方法靶向发热伴血小板减少综合征病毒基因组S片段保守区域设计引物和Taqman探针建立实时荧光定量RT-PCR方法.评价方法的灵敏度、特异性和重复性,并应用临床样本进行应用评价.结果该方法最低检测限为 100 拷贝/ml,其灵敏度为普通RT-PCR的 1 000 倍.在线性范围内,循环阈值(Ct值)与病毒RNA标准品之间表现出较强的线性相关性(R2＞0.999).批内和批间重复性的变异系数均小于 1.0%.该方法还具有高度特异性,不与其他病毒核酸交叉反应.应用发热伴血小板减少综合征确诊患者和健康志愿者血清样本对该方法进行了评估,结果显示,该方法检测灵敏度和特异度均为100.0%.此外,用该方法对 288 例疑似SFTSV感染患者的样本进行检测,有 14.9%的患者感染了SFTSV.该方法速度较快,包括核酸提取步骤在内仅需 2h.结论本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可作为SFTSV感染早期诊断的可靠方法.