放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌内高效介导位点特异性重组
Actinomyces phage R4 integrase Sre mediates site-specific recombination in Escherichia coli
摘要目的证明放线菌噬菌体重组酶Sre在大肠杆菌细胞内介导高效的位点特异性重组. 方法在大肠杆菌内构建分子内重组分析系统.质粒pBZP含有方向相同的attB和attP位点,分别位于lacZ基因的两侧.将pBZP电击导入含有sre基因的大肠杆菌细胞. 结果重组的发生导致lacZ基因的切除,使含有X-Gal成分的培养基上细菌菌落从蓝色变成白色.整合后DNA经酶切、PCR和DNA测序证实.发生100%重组率的attB和attP最小片段分别是50 bp和47 bp. 结论在大肠杆菌宿主环境中放线菌噬菌体重组酶Sre高效催化位点特异性重组.本分子内重组分析系统是一个简便而有效的方法.
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