人Epsilon干扰素在CHO细胞中的表达及生物学活性的研究

Expression of human interferon-ε in Chinese hamster ovary cell and its biological activity

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摘要目的为了研究新发现的人epsilon干扰素(hIFN-ε)的生物学活性,我们通过RT-PCR克隆了hIFN-ε基因,并构建pcDNA3.1/myc-his(-)A-hIFN-ε(以下简称pcDNA3.1A-hIFN-ε)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并研究真核细胞重组表达的rhIFN-ε的生物学活性.方法用TNF-α刺激人宫颈癌HeLa细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得全长cDNA,与pcDNA3.1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-ε,并在CHO细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物中的rhIFN-ε对多种病毒的抗病毒活性;MTT法检测其对A375、HeLa和A549细胞的生长影响,并通过在Wish、HeLa、A375细胞中诱导MxA抗病毒蛋白的产生研究hIFN-ε的抗病毒机制.结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果表明已经成功构建了重组体pcDNA3.1A-hIFN-ε,并在CHO细胞中稳定表达了rhIFN-ε蛋白,该蛋白具有抗HSV-Ⅰ、PolioV、Ad3和VSV病毒的作用,能够抑制HeLa、A375、A549细胞的生长,刺激Wish、HeLa、A375细胞产生MxA蛋白.结论本研究成功地构建了pcDNA3.1A-hIFN-ε真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达,证明了rhIFN-ε蛋白具有抗病毒和抗增殖活性,其抗病毒效应的分子机理可能与诱导细胞产生MxA抗病毒蛋白有关,为今后研究rhIFN-ε的生物学功能和基因重组药物研制及其开展基因治疗奠定了基础.