换一批
换一批鸭乙型肝炎病毒cccDNA Taq Man荧光定量PCR的建立
Establishment of the method for detecting DHBV cccDNA by the TaqMan fluorescence quantitative PCR
摘要目的 建立鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.方法 用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染TOP10菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作外标准品;在DHBV基因组负链两侧设计一对引物,并在引物问设计和荧光标记一段TaqMan探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,建立了DHBV cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法.结果 最低可检出104拷贝/ml;批内误差为0.2%～3.14%,批问误差为2.22%～4.43%;在105～102拷贝/ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2.8361ln(χ)+41.45,r=-0.9985].结论 该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术.
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主题词
矮壮素(Chlormequat)荧光(Fluorescence)乙型肝炎病毒, 鸭(Hepatitis B Virus, Duck)鸭(Ducks)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)
分类号
R5
栏目名称
检测技术
DOI
10.3760/j:issn:0254-5101.2007.07.025
发布时间
2007-09-03
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