摘要目的 探讨差速贴壁法对小型猪脂肪间质干细胞(ADSC)提取和纯化的可行性.方法 从两成软骨10月龄的中国实验用Ⅰ系小型猪皮下脂肪组织获取ADSC,培养4～6h倒置显微镜下观察,见少量细胞贴壁,立刻将含有未贴壁细胞的培养基接种到新培养瓶内继续培养,传统培养法不换培养瓶,以后均每3d换液1次.完全培养基传至第3代MTT法绘制生长曲线,并测定两种培养法获得的细胞不同代数的贴壁时间;诱导培养基向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞诱导并鉴定.贴壁时间、表面抗原阳性率、分化诱导染色阳性率实验数据比较采用单因素方差分析及t检验.结果 采用差速贴壁培养法可分离培养出小型猪ADSC,并可除去部分贴壁的成纤维细胞、上皮细胞和脂滴,传代后培养瓶中脂滴明显减少;差速贴壁培养法获得的ADSC在贴壁时间方面较传统方法获得的ADSC短,前者传代后的贴壁时间(3.5±0.2)h较后者(5.8±0.3)h短,差异具有统计学意义(t=12.55,P=0.01)两种方法获得的ADSC中CD34阳性率:差速法为(1.17±0.01)％,传统法为(0.99±0.03)％;CD44阳性率:差速法为(88.90±0.03)％,传统法为(89.23±0.10)％;CD106阳性率:差速法为(1.18±0.05)％,传统法为(1.56±0.06)％;差异均统计学意义(t=0.12,1.23,0.37,P=0.06,0.07,0.06).油红O、苏丹黑B、Von kossa、茜素红、阿尔新蓝、Ⅱ型胶原染色结果表明差速贴壁法获得的ADSC可分化为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞,且阳性染色率分别为(78±2)％、(82±6)％、(85±1)％、(83±3)％、(76±9)％、(74±1)％,较传统法的(68±1)％、(69±2)％、(73±0)％、(75±1)％、(69±3)％、(65±4)％高,差异具有统计学意义(t=5.21,12.56,16.27,10.33,17.01,23.97;P=0.02,0.03,0.01,0.01,0.00,0.00).结论 采用差速贴壁培养法可从小型猪皮下脂肪组织可以分离培养出ADSC,从细胞形态学、生物学特性及多向分化能力等方面都较传统法获得的ADSC具有优势.