换一批细胞因子对人视网膜色素上皮细胞syndecan-1表达的影响
Effects of cytokines on the expression of syndecan-1 in cultured human retinal pigment epithelial cells
摘要目的检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞syndecan-1表达的影响,并探讨其作用的信号转导途径.方法体外培养人RPE细胞,采用逆转录聚合酶链反应和免疫荧光法检测正常细胞syndecan-1·mRNA、蛋白的表达;免疫荧光法定性、定量观察不同刺激因子作用下syndecan-1的表达变化,包括:7、35 ng/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激24 h,1、6μg/ml脂多糖(LPS)刺激11h,7 ng/ml TNF-α刺激不同时间(0～24 h,每2 h为1个时间点,共13个时间点),30%单核/巨噬细胞株(THP-1细胞)上清液刺激3、14、43 h;细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路特异性阻断剂PD098059预处理2 h后对30%THP-1细胞上清液作用的调节;30%THP-1细胞上清液刺激细胞3 h后0.25%胰酶作用5 min,噻唑蓝法检测细胞贴壁情况.结果在正常RPE细胞中可检测到syndecan-1 mRNA和蛋白的表达;未受刺激的RPE细胞细胞膜、细胞浆及核仁呈强的黄绿色荧光,细胞核呈浅绿色荧光;随TNF-α、LPS浓度及时间增加,荧光强度呈减弱趋势(P＜0.01);30%THP-1细胞上清液刺激后细胞荧光强度明显减弱(P＜0.001).50μmol/L PD098059预处理2 h后可部分阻断30%THP-1细胞上清液的下调作用.与对照组相比,THP-1细胞上清液作用3 h后贴壁细胞数下降(P＜0.05).结论TNF-α和LPS可下调体外培养的人RPE细胞syndecan-1的表达;30%THP-1细胞上清液可下调RPE细胞syndecan-1的表达、促使细胞脱壁,且该作用至少通过了ERK 1/2信号转导通路.
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