淋病奈瑟菌主要外膜蛋白DNA疫苗的构建及免疫效果观察

Construction of the DNA vaccine of major outer membrane protein of Neisseria gonorrhoeae and investigation of immune effects after vaccination

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摘要目的克隆淋病奈瑟菌孔蛋白IB型(PIB)基因并构建其真核表达载体pCI-PIB,了解pCI-PIB免疫接种后诱导小鼠特异性体液和细胞免疫反应的效果.方法采用聚合酶联反应(PCR)扩增淋病奈瑟菌主要外膜蛋白PIB全长基因片段(960 bp),构建表达PIB的真核表达载体pCI-PIB.pCI-PIB肌内注射免疫BALB/c小鼠65只,100μg/次/只,亲和素-生物素-过氧化酶复合物(ABC)法检测其中10只pCI-PIB免疫小鼠肌细胞中PIB的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和特异性淋巴细胞增殖反应(MTT)法检测余下pCI-PIB免疫小鼠的特异性体液和细胞免疫应答效果.采用玻片凝集试验和补体溶菌试验检测pCI-PIB免疫小鼠血清的抗菌活性.结果 PCR可扩增出预期大小的全长PIB基因片段(960 bp),与报道PIB基因序列(GenBank No:AF090801)比较,重组质粒pCI-PIB中目的插入片段的核苷酸序列同源性可达99.28%.免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB并表达PIB.pCI-PIB免疫小鼠的血清中可产生较高效价的特异性IgG(1:4000),并产生特异性T细胞增殖反应,增殖指数(4.031)明显高于对照组(1.127)(t=71.71,P＜0.05).pCI-PIB免疫小鼠血清及阴道冲洗液均有凝集淋病奈瑟菌的作用,在补体参与下可杀灭细菌.结论本研究成功地构建了淋病奈瑟菌PIB基因重组真核表达载体pCI-PIB.pCI-PIB接种小鼠后可有效地引起特异性体液和细胞免疫反应,具有作为淋病奈瑟菌候选DNA疫苗的应用前景.