硫柳汞对结膜上皮细胞自噬调控及水杨酸钠对其保护机制的实验研究
Regulation of autophagy by thimerosal in conjunctival epithelial cells and the protective mechanism of sodium salicylate
摘要目的探讨不同浓度硫柳汞对人结膜上皮细胞自噬调控的影响及水杨酸钠对其保护的机制。方法在细胞培养时,依据添加药品种类分为硫柳汞实验组、水杨酸钠组、硫柳汞+水杨酸钠组及对照组。硫柳汞实验组采用浓度为0.00001%、0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%的硫柳汞处理30 min,随即清除药液;水杨酸钠组采用0.00001%、0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%水杨酸钠预处理30 min;硫柳汞+水杨酸钠组采用0.001%硫柳汞+0.001%水杨酸钠预处理30 min;对照组仅含有培养基。采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定检测细胞存活率。采用免疫印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ型和LC3-Ⅱ蛋白在自噬相关通路中的表达。采用免疫荧光法法检测自噬相关通路中核因子κβ(NF-κβ)、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白的表达。细胞存活率和蛋白的表达水平以±s表示,组内比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。结果以对照组为基数,0.00001%、0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%的硫柳汞实验组和水杨酸钠组细胞存活率分别为(97.06±1.71)%、(91.76±1.82)%、(89.46±4.67)%、(85.20±3.88)%、(77.93±2.72)%、(98.80±2.27)%、(97.98±3.17)%、(96.83±1.30)%、(96.08±2.40)%及(95.52±2.59)%,硫柳汞实验组内比较差异有统计学意义(F=30.66,P<0.05);各浓度水杨酸钠细胞存活率组内比较差异无统计学意义(F=1.86,P>0.05)。0.001%水杨酸钠+0.001%硫柳汞细胞的细胞存活率为(89.65±1.98)%,与0.001%硫柳汞细胞的细胞存活率比较,差异有统计学意义(t=8.51,P<0.01)。0.00001%、0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%硫柳汞细胞LC3-Ⅰ蛋白相对表达分别为0.74±0.11、0.86±0.08、0.97±0.09、1.02±0.07及1.14±0.04;LC3-Ⅱ蛋白相对表达分别为0.56±0.10、0.73±0.09、0.97±0.09、1.05±0.08及1.17±0.08,组间比较的差异有统计学意义(F=8.31,22.33;P<0.05)。对照组、0.00001%及0.001%硫柳汞组结膜细胞NF-κβ、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ表达量分别108.23±5.88、138.00±3.60、164.46±7.60、90.07±3.48、102.93±2.72、127.43±6.96、107.70±4.20、128.36±7.07及154.01±6.24,比较的差异有统计学意义(F=67.51,47.65,45.39;P<0.05);对照组、0.001%水杨酸钠+0.001%硫柳汞组结膜细胞NF-κβ、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的表达量分别为164.66±9.29、175.66±12.2、195.33±10.07、141.67±8.50、133.00±15.52及169.33±12.66,比较的差异有统计学意义(t=3.16,3.74,2.78;P<0.05)。结论硫柳汞能通过人结膜上皮细胞自噬,降低细胞存活率且0.001%的水杨酸钠能显著改善此情况。
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