羊膜对体外培养的兔视网膜Müller细胞增殖影响的实验研究

Effects of amniotic membrane on proliferation of retinal Müller cells: an in vitro experiment with rabbits

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摘要目的观察羊膜对体外培养的兔视网膜Müller细胞增殖能力的影响.方法 (1)取第四代兔视网膜Müler细胞以3×104个/ml接种于96孔板,200μl/孔,24h后加入不同浓度羊膜匀浆条件培养基(800、400、200、100μg/ml),培养24、48、96 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Müller细胞增殖率.(2)第四代兔视网膜Müller细胞以4×104个/ml密度接种于预置有盖玻片的6孔板中,24h后加入不同浓度的羊膜条件培养基,继续培养48 h后,免疫组化细胞核增殖抗原(PCNA)检测.(3)4代兔视网膜Müller细胞以4×104个/ml接种于6孔板中,24h后加入不同浓度的羊膜条件培养基,继续培养48 h,流式细胞仪观察细胞周期变化.结果随着条件培养基中羊膜匀浆浓度的增加,对兔视网膜Müller细胞的增殖效应逐渐增强,800μg/ml时获得最大增殖效应,细胞增殖率为62.5%;细胞周期分析显示:进入S期的细胞数明显增加(56.49%).在羊膜匀浆浓度恒定条件下,随着时间延长,其对视网膜Müller细胞的增殖效应逐渐加强,在48 h即达到较高的增殖效应,96与48 h相比差异无统计学意义(F=0.233、0.007,P=0.492、0.729).800μg/ml组和400μg/ml组PCNA阳性表达率(0.84±0.07;0.79±0.06)与对照组(0.64±0.12)相比差异具有统计学意义(x2=-0.182、-0.151,P=0.002、0.015).结论羊膜对体外培养的兔视网膜Müller细胞具有促进增殖作用,且呈浓度和时间依赖性.