换一批
换一批摘要篇首： 我们比较了结核分枝杆菌(结核菌)基因组DNA及其聚合酶链反应(PCR)产物的灵敏度与特异性，并对结核病人痰标本进行了检测。 一、材料和方法 1.菌种来源：24种分枝杆菌来自中国药品生物制品检定所，11种非分枝杆菌来自中国科学院微生物学研究所。 2.标本收集：90份痰标本来自本院结核科住院病人，经X线检查、临床表现确诊。30份非结核病人痰标本来自本院呼吸科、肿瘤科及北京大学第三医院呼吸科住院病人。 3.标本DNA提取：采用本室研制的标本前处理试剂盒。 4.引物：引物a：根据文献［1］报道设计。扩增产物为350 bp，5′-GAAGTCGTAACAAGC，5′-CAAGGCATCCACCAT；引物b：根据引物a扩增产物测序结果，选择碱基差异性设计，扩增产物为250 bp，5′-CGGCAGCGTATCCATTGATG，5′-CACGAAAACGCCCCAACTG。 5.PCR扩增：引物a扩增参数：94℃，1 min；45℃，3 min；72℃，1 min；循环30次，最后72℃延伸10 min。引物b扩增参数：94℃，1 min；61℃，1 min；72℃，1 min；循环30次，最后72℃延伸10 min。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果。
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