换一批
换一批乙型肝炎病毒合成e基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性
Expression of hepatitis B virus e gene synthesized in Pichia pastoris and the immunological characterization of the product
摘要目的 合成适合酵母表达的乙型肝炎病毒(HBV)e抗原基因,在毕赤酵母中表达出高免疫反应性和特异性的重组乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg).方法 采取基因搭桥法及Taq酶聚合反应,选用酵母菌偏爱的同义密码子替换野生型e基因的部分密码子,制备合成e基因,插入pPICZαA酵母菌表达载体.携带有合成e基因的pPICZαA转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HBeAg.结果 酶切电泳及DNA测序证实合成的e基因已正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、immunoblt及ELISA显示HBeAg在毕赤酵母中高效分泌表达,表达量约为63 mg/L,培养上清液ELISA测定效价1∶ 81 920,最大吸光度值达2.8;重组HBeAg与乙型肝炎病毒核心抗体间无交叉反应.结论 毕赤酵母表达系统高效分泌表达出与乙型肝炎病毒核心抗原间无交叉抗原性、具有良好免疫反应性的HBeAg.
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主题词
毕赤酵母(Pichia)基因(Genes)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus)乙型肝炎e抗原(Hepatitis B e Antigens)变态反应和免疫学(Allergy and Immunology)
分类号
R5
栏目名称
临床实验诊断研究
DOI
10.3760/j:issn:1009-9158.2006.09.012
发布时间
2006-11-30
基金项目
广东省自然科学基金
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