抗凝血离心沉淀红细胞中残留基因组DNA的质量分析

Quality Analysis of Residual Genomic DNA in Red Blood Cells Precipitated by Anticoagulation Blood Centrifugation

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摘要目的探究抗凝血离心后红细胞样本中基因组DNA(gDNA)的质量及不同处理方式对gDNA产量的影响.方法血液样本均来自于武汉大学中南医院生物样本库,采用试剂盒分离柱纯化的方式提取冻存4年及未冻存的抗凝血红细胞样本中gDNA,使用Nanodrop One超微量分光光度计、Qubit 4荧光计和Agilent 4200 TapeStation生物分析仪分别对gDNA样本进行检测,从浓度、纯度、完整性进行样本质量评估.结果从冻存4年的红细胞样本中可提取得到纯度和完整性较高的gDNA,50例250μL冻存4年红细胞样本的gDNA产量中位数为8.80μg,A260/A280比值为1.92±0.08,A260/A230比值为2.23±1.37.与不做处理的未冻存红细胞样本比较,利用红细胞裂解液处理未冻存红细胞样本留取白细胞提取gDNA会使产量降低(P<0.01),而gDNA纯度没有明显差异.未冻存与冻存4年的红细胞样本gDNA产量比较差异无统计学意义(P>0.05).未冻存白膜层样本gDNA产量明显高于未冻存红细胞样本(P<0.01).结论抗凝血离心后去除血浆和白膜层的剩余红细胞样本中,仍有少量白细胞残留,选择合适的方法可提取得到纯度较高的gDNA,生物样本库存储红细胞样本能使血液样本得到更充分利用.