换一批摘要目的 构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据.方法 通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD442,将重组质粒电转化入屎肠球菌中,通过卡纳霉素以及菌落PCR筛选得到ORF5基因缺失株,进行PCR以及测序鉴定;比较突变株与野生株体外生存能力以及对膀胱癌细胞的粘附率.结果 利用重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,并连接至PCVD442自杀质粒;重组自杀质粒进入屎肠球菌后出现了同源重组事件,ORF5基因被卡纳霉素基因替代,通过PCR及测序分析证实基因组ORF5基因已敲除;通过细胞培养证实野生株对膀胱癌细胞的粘附率高于突变株.结论 成功构建屎肠球菌ORF5基因突变株,突变株黏附膀胱癌细胞能力减弱,初步证实ORF5基因与屎肠球菌的致病力有关.
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栏目名称
DOI
10.11816/cn.ni.2016-161132
发布时间
2016-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广州市番禺区科信局支助项目（2014-Z03-67）
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