换一批
换一批RAPD在肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌分型中的应用
Application of RAPD in the typing of Klebsiella pneumoniae and acid-producing Klebsiella oxytoca
摘要目的 探索随机扩增多态DNA技术(RAPD)在肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌分型中的应用.方法 收集2022年12月—2023年10月清远市人民医院临床分离的产酸克雷伯菌22株、肺炎克雷伯菌74株,通过筛选模板、单引物、RAPD反应体系及扩增参数、双引物,构建克雷伯菌分型体系,后进行聚合酶链反应(PCR)扩增仪器间、扩增批次内(间)重复性实验.对96株已知克雷伯菌确定分型相似度标准,运用NTsys 2.10软件构建遗传距离聚类图.结果 煮沸提取基因组DNA满足实验需要,可在—20℃、60d条件下稳定保存;筛选出7条单引物用于双引物配对组合,最佳双引物反应体系为:引物各1 μl,模板DNA 0.75 μl,2×PCR Taq Mix 9 μl,ddH2O 8.25 μl;最佳扩增参数为Tm=38 ℃,退火40 s,循环30次;重复性实验获得的RAPD图谱结果基本一致.分型效果最好的双引物组合为RAPD1+M13,该引物组合可在86％的相似度下区分肺炎克雷伯菌与产酸克雷伯菌的差异,将96株克雷伯菌分为40种亚型.结论 上述双引物组合可初步用于RAPD对肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌的种间分型,操作简便,具有较好重复性和稳定性,对病原微生物的分子流行病学分类具有重要意义.
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关键词
随机扩增多态DNA技术肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌细菌分型技术Random amplified polymorphic DNA techniqueKlebsiella pneumoniaeAcid-producing Klebsiella oxytocaBacterial typing techniques
分类号
R378
栏目名称
基础研究
DOI
10.11816/cn.ni.2024-240019
发布时间
2024-11-15
基金项目
广东省医学科学技术研究基金资助项目
清远市科技计划基金资助项目
清远市人民医院医学科研基金资助项目
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