换一批衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶α亚基相互作用机制
Mechanisms of interaction between specific transcription activating factor GrgA of Chlamydia and RNA polymerase α subunit
摘要目的 研究衣原体基因转录调控过程中基因通用调节因子A(GrgA)与RNA聚合酶(RNAP)α亚基相互作用的关系,以提高GrgA和RNAP参与衣原体转录和调控机制的认识.方法 本研究通过引物设计,采用聚合酶链反应(PCR),构建携带His或Strep蛋白标签的衣原体RNA聚合酶(cRNAP)α亚基和GrgA的各种融合蛋白表达载体,将表达载体转入ArcticExpress表达菌株的化学感受态细胞菌株,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导13 ℃低温表达相应蛋白,借助体外蛋白牵出试验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(WB)分析鉴定出GrgA与cRNAP α亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列.结果 cRNAP α亚基能与 GrgA 结合,GrgA 与 α△(277-377)有结合,与 α△(1-259)无结合;α 亚基与 GrgA△(1-64)、GrgA△(65-112)、Gr-gA△(114-165)、GrgA△(166-206)、GrgA△(207-268)均有结合.结论 GrgA 能与 cRNAP α 亚基结合;cRNAP α 亚基与GrgA的结合位点位于α亚基N末端的1-259位氨基酸序列;GrgA通过多个氨基酸序列位点与cRNAP α亚基结合;cRNAP α亚基的N末端可能同样参与了转录调控过程.
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关键词
衣原体基因通用调节因子A衣原体RNA聚合酶亚基融合蛋白牵出试验相互作用ChlamydiaGeneral regulator factor AChlamydia RNA polymeraseSubunitFusion proteinPull-down experimentInteractive effect
栏目名称
DOI
10.11816/cn.ni.2025-236674
发布时间
2025-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（31370209）
江苏省高等学校基础科学(自然科学)研究重大项目（23KJA310004）
南通市基础科学研究计划项目（JC22022043）
南通市卫生健康委员会面上指令课题（MS2022064）
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