换一批
换一批多药耐药相关蛋白反义RNA对耐阿霉素人小细胞肺癌细胞株GLC4/ADR耐药性的调节
Modulation of human small cell lung cancer cell line GLC4/ADR multidrug resistance in the inhibition of multidrug resistance-associated protein and its antisense
摘要目的构建表达多药耐药相关蛋白(MRP)反义RNA的真核表达载体,转染耐药细胞株,初步探讨其影响多药耐药(MDR)的作用机理.方法以MRPcDNA为模板,应用PCR扩增MRP mRNA5′端(含起始子密码)及MRP mRNA 3′端(含终止子密码)片段,通过定向克隆方法,构建表达MRP反义RNA的两个重组载体.通过Lipofectamine将其导入小细胞肺癌(SCLC)耐阿霉素(ADR)的细胞株GLC4/ADR中,经G418筛选,得到分别含pcDNA3空载(M0)、MRP mRNA5′端为靶区的反义RNA(Ma),MRP mRNA3′端为靶区的反义RNA(Mb)的3个细胞克隆.检测细胞内ADR的蓄积改变以及荷瘤裸鼠对ADR的敏感性.结果经RT-PCR检测,外源片段可获稳定表达.Ma细胞及Mb细胞中,MRP表达分别抑制约14.0%和83.0%,且胞内ADR蓄积量均有一定程度的增加;对ADR的耐药倍数与对照细胞M0相比,分别下降9.5%和28.4%.虽然,MRP反义RNA对细胞的生长、细胞周期及ADR诱导的早期凋亡均无明显影响,但可提高荷瘤裸鼠对ADR的敏感性.结论 MRP反义RNA能抑制MRP蛋白的表达,并使转染细胞内ADR浓度增加,从而逆转MRP介导的MDR.对于配合化疗,提高MRP高表达患者的疗效,具有潜在的应用意义.
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主题词
细胞(Cells)多药耐药相关蛋白质类(Multidrug Resistance-Associated Proteins)小细胞肺癌(Small Cell Lung Carcinoma)人(Persons)癌(Carcinoma)
分类号
R73
栏目名称
基础研究
DOI
10.3760/j.issn:0253-3766.2001.05.002
发布时间
2004-01-08
基金项目
国家自然科学基金
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