换一批猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位
Preparation of polyclonal antibodies and subcellular localization of non-structural protein 3 encoded by feline coronavirus
摘要冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一.本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50-550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上.在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白.在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白.以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白.采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象.Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础.
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关键词
猫冠状病毒非结构蛋白3原核表达多克隆抗体亚细胞定位feline coronavirusnon-structural protein 3prokaryotic expressionpolyclonal antibodysubcellular location
分类号
S855.3
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9209.2022.08.011
发布时间
2023-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
浙江大学-帕特诺尔联合研发中心项目（K20211327）
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