换一批CMV启动子调控的VEGF-shRNA表达载体的构建及有效干扰序列的筛选
Construction of VEGF gene-targeted small interfering RNA mediated by CMV promoter and its silencing effect
摘要目的:构建针对人VEGF基因的小干扰RNA(siRNA)的表达载体,实现CMV启动子调控,转染肿瘤细胞后观察其对VEGF基因的干扰作用,并筛选出有效的VEGF-shRNA.方法:设计三对VEGF靶向的发夹状shRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入质粒pDC311-SV40-RC中,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人骨肉瘤细胞U-2 OS,分别培养3d和7d后收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达.结果:将针对VEGF基因的siRNA的双链寡核苷酸片段成功克隆到pDC311-SV40-RC载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染U-2 OS细胞后,ELISA方法检测蛋白表达水平证实干扰序列3能有效降低VEGF的表达.结论:成功构建了CMV启动子调控的针对VEGF基因的siRNA载体,转染肿瘤细胞后可抑制VEGF的表达,并筛选出有效的干扰序列.
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关键词
RNA,小分子干扰血管内皮生长因子A转染启动区(遗传学)寡核苷酸类序列分析RNA,small interferingVascular endothelial growth factor ATransfectionPromoter regions (Genetics)OligonucleotidesSequence analysis
医学主题词
转染(Transfection)序列分析(Sequence Analysis)细胞(Cells)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)遗传学(Genetics)
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2010.02.012
发布时间
2010-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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