换一批
换一批苦瓜核糖体失活蛋白MAP30的原核表达和生物活性研究
Expression of recombinant ribosome inactivating protein MAP30 in E.coli and its biological activity
摘要目的:从苦瓜籽中克隆HIV-1整合酶抑制剂MAP30,构建其表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,用于MAP30在细胞内的转运机理研究.方法:从成熟苦瓜种子中提取基因组DNA,通过PCR的方法扩增出MAP30基因的全长,并将其克隆进入原核表达载体pET-30a,转化Eoli.BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和纯化,梯度咪唑洗脱.MTT法分析生物学活性.结果:测序发现插入的MAP30基因序列正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确,且MAP30主要以可溶形式表达.MTT法测定重组的MAP30具有生物学活性,且对肿瘤细胞的毒性远远大于对正常细胞的毒性.结论:本研究成功地构建了MAP30的表达系统,并实现了MAP30的可溶性表达,表达后的蛋白具有生物学活性,可用于抗体-毒素的肿瘤靶向药物的合成.
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分类号
R996
栏目名称
论著
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2010.03.009
发布时间
2010-07-13
基金项目
浙江省重大科技专项项目
国家自然科学基金
浙江大学医学院中青年科研启动基金
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