换一批磁珠法半自动提取全血基因组DNA条件的优化
Optimization of genomic DNA extraction with magnetic bead- based semiautomatic system
摘要目的:探讨磁珠法提取基因组DNA的影响因素,建立快速、高效、批量提取全血基因组DNA的优化方案.方法:使用磁珠法核酸自动提取系统从全血中提取基因组DNA,紫外分光光度计测定DNA浓度和纯度.采用正交试验设计分析裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个因素的主效应和全血量与裂解时间、磁珠量,裂解时间与磁珠量的二阶交互作用对所提取DNA浓度和纯度的影响.结果:裂解时间、全血量、磁珠量和乙醇浓度4个主效应对DNA浓度的影响均存在统计学差异(P＜0.05),当裂解时间为15 min,全血量为100μl,磁珠量为80μl,乙醇浓度为80％时,DNA平均浓度最高.磁珠量、裂解时间和全血量的交互作用对DNA OD260/OD280的比值有影响(P=0.008和P=0.013).当磁珠量为40μl,裂解时间为15 min,全血量为100μ1时,OD260/OD280的比值较好.磁珠量和乙醇浓度影响DNA OD260/OD230的比值(P=0.017和P＜0.05),磁珠量为40μl,乙醇浓度为80％时,OD260/OD230的比值更好.结论:当DNA得率优先考虑时,可以选择裂解时间15 min、全血量100μl、磁珠量80μl、乙醇浓度80％的提取条件；而对DNA纯度要求较高时,可以将磁珠量改为40μl,以获得最优DNA提取效果.
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分类号
R394-33（医学遗传学）
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2012.03.015
发布时间
2012-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技支撑计划（2009BAI80B02）
中央高校基本科研业务费专项（2010QNA7022）
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