换一批
换一批钩端螺旋体groEL基因原核表达及其产物免疫保护作用
Prokaryotic expression of Leptospira interrogans groEL gene and immunoprotection of its products in hamsters
摘要目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株groEL基因原核重组表达系统,了解重组表达的GroEL蛋白(rGroEL)对金地鼠的免疫保护作用.方法:采用高保真PCR扩增问号钩体赖株groEL基因并测序,常规方法构建groEL基因原核表达系统.采用SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检查rGroEL表达情况及其可溶性,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.观察rGroEL免疫金地鼠对问号钩体赖株感染的保护率.采用MAT法检测免疫动物血清与我国流行问号钩体血清群交叉凝集效价.结果:所克隆的groEL基因核苷酸和氨基酸序列与GenBank中相应基因完全相同.所构建的groEL基因原核表达系统能表达可溶性rGroEL.100和200 μgrGroEL对金地鼠的免疫保护率分别为50.0％和75.0％.rGroEL免疫金地鼠血清可不同程度地凝集各问号钩体血清群.结论:GroEL蛋白是问号钩体属特异性保护性抗原,可用于制备通用性钩体基因工程疫苗.
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