换一批摘要目的：克隆表达人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1，用于研究化合物的代谢途径。方法：采用反转录PCR得到人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1基因全长cDNA。将测序正确的cDNA连接到pET-28 a阳性表达载体上并在大肠杆菌BL21（ DE3）中稳定表达。利用亲和色谱纯化表达得到重组酶，以2，4-二硝基氯苯为底物，测定340 nm波长处吸收度的变化，检测酶活性。结果：PCR产物与克隆载体pMD19-T连接后的质粒测序结果表明，目的基因的cDNA序列完全正确。表达质粒在大肠杆菌BL21（ DE3）中获得良好的可溶性表达，经镍离子亲和柱纯化后目的蛋白较纯，具有较好的催化活性。所表达的 hGSTA1、hGSTT1和hGSTP1酶比活性分别为17．55、0．02、18．75μmol· min-1· mg-1蛋白。结论：成功构建了人谷胱甘肽硫转移酶GSTA1、GSTT1和GSTP1的原核表达系统，得到的重组酶可用于药物代谢研究。
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关键词
谷胱甘肽转移酶/生物合成克隆, 分子基因表达色谱法, 亲和基因扩增质粒逆转录聚合酶链反应Glutathione transferase /biosynthesisCloning,molecularGene expressionChromatography,affinityGene amplificationPlasmidsReverse transcriptase polymerase chain reaction
分类号
Q55（酶）
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2014.03.009
发布时间
2014-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重大新药创制"科技重大专项（2012ZX09506001-004）
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