换一批
换一批利用内源荧光筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂
A method based on endogenous fluorescence determination for screening NAMPT inhibitors
摘要目的:建立内源荧光检测筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂的方法.方法:以1,4-二马来酰亚胺基丁烷(BMB)交联G355 C/D393C双突变NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交联型NAMPT蛋白的自发荧光变化(280 nm激发波长,333 nm发射波长)检测化合物与蛋白的结合,以核磁共振方法体外检测化合物对NAMPT催化作用的影响,以MTT方法检测化合物对人肺癌A549细胞活性的影响.结果:FK866在0.1～1.0 μmol/L浓度范围内能浓度依赖地抑制野生型NAMPT自发荧光,但对交联型NAMPT的自发荧光没有影响.迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对两种蛋白自发荧光的抑制率无显著差异.FK866能够显著抑制NAMPT的催化作用,但迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对NAMPT的催化作用无抑制作用.FK866显著抑制A549细胞的活性,而迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对A549细胞活性无抑制作用.结论:基于野生型和交联型NAMPT蛋白的内源性荧光检测法可以筛选与NAMPT蛋白结合的化合物,并分析化合物是否结合在NAMPT的催化活性部位,迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸可结合在NAMPT催化活性位点以外的部位.
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关键词
光谱法,荧光转移酶类NAD酶抑制剂药物评价,临床前Spectrometry,fluorescenceTransferasesNADEnzyme inhibitorsDrug evaluation,preclinical
分类号
R96
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2014.05.010
发布时间
2014-08-21
基金项目
国家重大科学研究计划（2013CB910200）；
国家自然科学基金（81072619,81373392）
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