换一批人源性抗乳腺癌HER2噬菌体单链抗体库的构建与筛选
Construction and identification of anti-HER2 phage display single chain fragment of variable region library in human breast cancer
摘要目的:构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体(scFv)库,筛选和鉴定抗乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER2)特异性scFv,为HER2和CXC趋化因子受体4 (CXCR4)双靶向融合蛋白的研制提供靶向HER2的高亲和力序列.方法:取已确诊的乳腺癌患者癌旁淋巴组织,提取总RNA;构建可变区基因的T载体库,将重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因与pCANTAB连接肽连接,获得pCANTAB-scFv,电转化感受态大肠杆菌TG1;以M13K07辅助噬菌体进行感染,获噬菌体抗体库;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测筛选后获得的噬菌体抗体活性,以免疫组织化学法检测抗体亲和力,并通过测序进一步鉴定.结果:成功构建大容量pCANTAB-scFv抗体库,获得的scFv长度为750 bp,VH和VL长度分别为375和330 kb;电转化大肠杆菌TG1后酶切验证插入片段大小正确,得到库容为2.48×108的大容量抗体库;通过噬菌体展示和淘洗筛选,富集针对乳腺癌细胞株SKBR-3表面抗原的抗体库;所得抗体对HER2有高度的亲和力和特异性,对乳腺癌组织HER2抗原也具有较高的亲和力;测序结果与人IgG抗体进行对比,所获得的scFv具有高度的人源性.结论:主要构建了大容量人源性抗乳腺癌细胞的噬菌体scFv库,并筛选获得可特异性识别人乳腺癌HER2的高亲和力scFv,为制备以HER2为靶点的抗肿瘤HER2和CXCR4双靶向融合蛋白提供了载体.
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关键词
乳腺肿瘤/免疫学DNA,互补/遗传学基因文库抗体,细菌/遗传学细菌噬菌体/遗传学受体,erbB-2受体,CXCR4聚合酶链反应Breast neoplasms/immunologyDNA,complementary/geneticsGene libraryAntibodies,bacterial/geneticsBacteriophages/geneticsReceptor,erbB-2Receptors,CXCR4Polymerase chain reaction
分类号
R737.9（泌尿生殖器肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3785/j.issn.1008-9292.2014.07.006
发布时间
2014-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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