不同量甲醛固定液对荧光原位杂交法检测乳腺原发性浸润癌HER2基因扩增的影响

Volume of 4% neutral buffered formaldehyde affects the results of HER2 gene detected by fluorescence in situ hybridization in primary invasive breast cancer

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摘要目的:通过分析不同的体积量甲醛固定液对荧光原位杂交(FISH)法检测乳腺原发性浸润癌人类表皮生长因子受体2(HER2)基因扩增的差异,为建立和优化乳腺癌HER2 基因扩增检测过程中的标本固定方法提供实验依据.方法:选取中山市博爱医院2014 年6 月至2016 年10 月手术切除乳腺原发性浸润癌109例,同一肿瘤病变部位切取组织七块,根据随机数字表分为A、B、C、D、E、F、G 组.使用4%中性(磷酸盐缓冲)甲醛作为固定液,从A 组到G 组固定液量与所浸泡组织体积的比例分别为3∶1、6∶1、9∶1、10∶1、15∶1、20∶1、25∶1,固定15 h 后制作石蜡切片.采用FISH 法检测HER2 基因扩增,观察各组HER2 基因扩增结果的差异.结果:在荧光显微镜下,A、B、C 组的组织轮廓较模糊,出现细胞碎片,部分探针定位欠佳,出现信号丢失、核发空现象,见明亮的桔红/绿色荧光信号;D、E、F、G 组的组织轮廓清晰而完整、背景洁净、探针定位准确,见耀眼的桔红/绿色荧光信号.A ~D组基因扩增阳性率逐渐增高(χ2 =8.601,P <0.01),D ~G 组基因扩增阳性保持稳定;固定液量与所浸泡组织体积的比例在10∶1以下(A、B、C 组)时,HER2 基因扩增状态不稳定,随着固定液量的增加不断出现新的基因扩增阳性患者;固定液量与所浸泡组织体积的比例在10∶1及以上(D、E、F、G 组)时,HER2 基因扩增阳性率稳定在24.77%;D、E、F、G 组的基因扩增阳性率高于A、B、C 组(均P <0.05).结论:采用FISH 法检测乳腺原发性浸润癌HER2 基因扩增,固定液的量要保证至少是所浸泡组织体积的10 倍以上方可获得确切而稳定的实验结果.