脓毒性急性肾损伤小鼠线粒体DNA损伤修复相关基因的筛选

Screening of mitochondrial DNA damage repair genes in rats with septic acute kidney injury

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摘要目的:筛选脓毒性急性肾损伤(SAKI)中参与线粒体DNA(mtDNA)损伤修复的相关基因.方法:40只清洁级雄性C57 BL/6 J小鼠随机分为SAKI组(28只)和对照组(12只).采用盲肠结扎穿刺术建立SAKI小鼠模型.分别于术后8、24、48 h采集两组的血液和肾脏标本,干式生化仪检测血清肌酐和尿素氮,ELISA法检测血清炎症因子表达水平;HE染色观察肾脏组织病理学变化.RNA测序和生物信息学分析筛选mtDNA损伤修复相关基因;实时定量RT-PCR法和免疫组织化学法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平.结果:SAKI组小鼠术后均出现脓毒症症状,死亡16只;血清炎症因子(TNF-α和IL-6)、肌酐和尿素氮水平均高于对照组(P<0.05或P<0.01);肾小管上皮细胞肿胀,炎症细胞浸润,并可见大量细胞空泡形成,提示建模成功.生物信息学分析筛选出Gadd45α、Bcl2 l1、Cdkn1 a、Jun、Rela、Nfkbia和Nfkb1等线粒体DNA损伤修复相关基因,实时定量RT-PCR检测以上基因表达量结果与RNA测序趋势一致.SAKI组Gadd45α主要在肾小管上皮细胞核中表达,其阳性表达率高于对照组(P<0.05).结论:Gadd45α、Bcl2l1、Cdkn1a、Jun、Rela、Nfkbia和Nfkb1基因参与了SAKI中mtDNA损伤修复,可以作为SAKI防治的新靶点.