转染瘦素人胎盘源间充质干细胞对经X射线辐照后人脐静脉内皮细胞的成血管潜能和周围炎症的影响
Effects of leptin-modified human placenta-derived mesenchymal stem cells on angiogenic potential and peripheral inflammation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) after X-ray radiation
摘要目的:放创复合伤是一种以血管损伤和促炎细胞因子缺乏为特征的难愈性创伤.瘦素(leptin)的直接应用在血管生成和炎症中起着重要作用.本研究构建了一种可持续稳定的leptin表达系统――leptin修饰的人胎盘来源间充质干细胞(HPMSCs/leptin),并探究其对经X射线辐照后的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的成血管潜能及周围炎症的影响和潜在机制.创新点:可持续稳定的leptin表达系统(HPMSCs/leptin)促进受X射线辐照后HUVECs的成血管潜能及外周炎症反应,有助于解决放创复合伤伤口愈合过程中血管损伤和促炎因子缺乏的问题.方法:利用慢病毒载体将leptin基因转染HPMSCs获得HPMSCs/leptin.采用X射线单次照射HUVECs,剂量为20 Gy.细胞迁移侵袭实验技术(Transwell)检测照射后HUVECs的迁移情况.在Transwell体系的基础上,建立HPMSCs与受辐照HUVECs共培养体系.CCK-8比色法测定细胞增殖.酶联免疫吸附法(ELISA)检测促炎细胞因子(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-1α(IL-1α)、IL-6和IL-8)的分泌.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测促血管生成因子(VEGF和bFGF)mRNA的表达.蛋白免疫印迹法(western blot)检测核因子 κB(NF-κB)和JAK/STAT信号通路的相关分子表达.结论:可持续稳定的leptin表达系统(HPMSCs/leptin)具有更好的细胞增殖、迁移和成血管潜能.HPMSCs/leptin单独培养和HPMSCs/leptin与受辐照HUVECs共培养体系中,促炎细胞因子的分泌增加与NF-κB和JAK/STAT信号通路的相互作用有关.HPMSCs/leptin可能促进X射线照射后HUVECs的成血管潜能和外周炎症反应.
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