HPLC法测定五种产地地龙中次黄嘌呤和肌苷的含量

Determination of Hypoxanthine and Inosine in Five Origins of Geosaurus by HPLC Method

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摘要目的:建立地龙中次黄嘌呤与肌苷含量的测定方法,测定五种产地地龙成分,为地龙成分的提取工艺研究、质量分析探索新型高效的研究方法.方法:建立HPLC高效液相色谱法测定分析方法.色谱柱Agilent extend C18色谱柱,4.6 mm×250 mm,粒径:5 μm.流动相为甲醇-0.2%磷酸,波长选择254 nm,进样量选择20 μL,柱温为 30℃,使用梯度洗脱法,建立次黄嘌呤和肌苷的标准曲线,进行精密度试验,稳定性试验,重复性试验,加样回收试验等方法学考察.结果:次黄嘌呤标准曲线:y=78.819x+245.92,R2=0.999 9,在 10.08～161.28 μg·mL-1 范围内呈良好线性关系;肌苷标准曲线:y=56.566x+68.333,R2=0.999 5,在 20.08～321.28 μg·mL-1范围内呈良好线性关系.实验精密度、稳定性、重复性良好,计算得到次黄嘌呤的平均回收率为 95.43%,RSD值为 1.52%(n=6);肌苷的平均回收率为 99.86%,RSD 值为 2.36%(n=6),广东、河南、海南、上海、广西五种产地地龙的次黄嘌呤含量分别为:0.533 5、0.346 8、0.687 4、0.569 4、0.794 5 mg·g-1;肌苷含量为:1.562 5、0.567 4、1.126 7、0.843 6、1.284 9 mg·g-1.结论:建立的HPLC高效液相色谱法,梯度洗脱效果较好,实验准确度良好,精密度良好,稳定性良好,重复性高,是一种高效的分析测定方法.