换一批摘要目的 杜仲总黄酮对骨折小鼠成骨细胞分化的影响.方法 建立小鼠骨折模型,分离成骨细胞,MTT法用于检测细胞活力,选取合适药物浓度.成骨细胞分为雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤组、杜仲总黄酮组,药物干预后使用ALP染色检测成骨细胞分化能力,应用流式细胞术测定成骨细胞的凋亡情况,通过RT-qPCR和Western blot评估自噬标志物LC3的表达水平.结果 MTT检测筛选出合适的时间和浓度分别进行干预,在随后的体外实验中使用10 nmol/L雷帕霉素、1 mmol/L 3-甲基腺嘌呤、5 μmol/L 杜仲总黄酮,孵育48h后,3-甲基腺嘌呤组小鼠原代成骨细胞的凋亡率比对照组升高(P<0.05);雷帕霉素组、杜仲总黄酮组小鼠原代成骨细胞ALP染色数量比对照组增加;雷帕霉素组及杜仲总黄酮组小鼠原代成骨细胞中LC3 mRNA的表达比对照组升高(P<0.01);雷帕霉素组及杜仲总黄酮组小鼠原代成骨细胞中LC3Ⅱ/LC3I蛋白表达比对照组升高(P<0.05),而3-甲基腺嘌呤组小鼠原代成骨细胞中LC3Ⅱ/LC3I的蛋白表达水平比对照组下降(P<0.05).结论 杜仲总黄酮可能通过激活成骨细胞自噬,促进成骨细胞分化,抑制成骨细胞凋亡,从而促进骨折愈合.
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