换一批黄单胞杆菌纤维素酶的原核表达及固定化研究
Prokaryotic expression of the cellulase of Xanthomonas campestris pv.Campestris and its immobilization
摘要从野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris)中PCR克隆得到删除信号肽的纤维素酶基因engXCA△SP,并成功使用CPEC(circular polymerase extension cloning)方法构建了原核表达载体pET28a-engXCA△SP；将该载体转入大肠杆菌rosetta (DE3)中,用IPTG诱导蛋白质的表达；通过Ni-NTA树脂非变性亲和纯化到了较纯的蛋白.SDS-PAGE电泳结果表明:engXCA△SP基因编码出约50 kD的蛋白质ENGXCA△SP.然后对该酶成功进行了固定化.该酶比活为60 U·mg-1,固定前后最适温度为53℃与62℃,最适pH为5.4与5.8,动力学常数分别为Vmax:411 μmol·mL-1 ·h-1与383 μmol·mL-1·h-1,Km:0.2500％与0.3125％.
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DOI
10.3969/j.issn.1004-1524.2012.02.021
发布时间
2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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