换一批
换一批一步法CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR诊断方法的建立与初步应用
Development and application of double real-time fluorescent quantitative RT-PCR assay for detection of PRRSV and CSFV
摘要根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应;可以检出20个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)低于4％,方法重复性好.应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对50份疑似病例组织进行检测,结果荧光定量RT-PCR检出30份PRRSV阳性,13份CSFV阳性,均高于常规RT-PCR方法的检出数(24份PRRSV阳性,10份CSFV阳性).本研究建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异性好、灵敏度高的特点,可用于PRRSV和CSFV的实验室快速诊断和流行病学调查.
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关键词
猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重实时荧光定量RT-PCRclassical swine fever virus (CSFV)porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)double real-time fluorescent quantitative RT-PCR
分类号
S851.34+7.1
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-1524.2015.04.04
发布时间
2015-07-03
基金项目
浙江省重大科技专项农业项目（2008C12049）；
浙江省重点科技创新团队（2012R10027-13）
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