换一批
换一批摘要目的 通过引物设计和退火反应产生内切酶的粘性末端,旨在开发一种高效、简单、可靠的分子克隆方法.方法 选定限制性内切酶(平末端或者粘性末端)设计3条或4条引物,同时进行两次独立的聚合酶链式反应(PCR),随后把两次PCR产物回收后混在一起经过解链退火,再将其与双酶切的载体质粒进行连接反应,最后转化即可得到目的克隆. 结果 利用此方法成功一次性将若干靶基因(P90rsk、Nprl2、Mios、Ragc、S6k、Pkca)构建在经EcoRV和Notl双酶切后的pcDNA3.1(+)载体上,经酶切及测序验证. 结论 该方法无需考虑靶基因内部是否存在酶切位点,可省去PCR产物酶切及之后的纯化回收过程,可快速并准确地克隆目标基因.
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关键词
分子克隆聚合酶链反应退火限制性酶切位点粘性末端Molecular cloningPolymerase chain reactionAnnealingRestriction siteCohesive end
栏目名称
论著
DOI
10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.14.2017-1035
发布时间
2017-09-15
基金项目
浙江省自然科学基金资助项目
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